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乙肝在研新药REP2139,DNAJB12是潜在靶点,对HBsAg分泌至关重要

原标题:乙肝在研新药REP2139,DNAJB12是潜在靶点,对HBsAg分泌至关重要

在法国巴黎举行的2022年国际乙肝病毒(HBV)科学会议上,研究人员介绍了生物制药公司(Replicor)研发的一种核酸聚合物(NAP)REP2139最新进展,即识别抗病毒核酸聚合物REP 2139中 Hsp40 伴侣 DNAJB12 的作用机制,并确定其在乙肝表面抗原(HBsAg)分泌中至关重要。

乙肝在研新药REP2139,DNAJB12是潜在靶点,对HBsAg分泌至关重要

研究人员介绍,乙肝病毒的亚病毒颗粒(SVP)在构建循环中的 HBsAg > 99.99。SVP的形态发生/分泌的分子机制尚不清楚。NAPs,它能够在不影响乙肝e抗原(HBeAg)或 Dane 颗粒释放的情况下干扰 SVP 的组装/分泌,并与干扰素和 TDF 联合使用时,可以实现 HBsAg 高损失率和功能性治愈。

图1,DNAJB12的抑制及其对HBsAg分泌的影响

(A) DNAJB12的Western-blot。在第6天测定HepG2.2.15细胞、shRNA阴性细胞系(mock)或敲除DNAJB12细胞系(KD DNAJB12)中DNAJB12水平。(B)转染DNAJB12 shRNA慢病毒后6天对HBsAg分泌抑制的影响。

REP 2139的共免疫沉淀/下拉试验:研究人员进行了 MS/MS 分析数据,发现 DNAJB12 是 REP 2139 的潜在靶点。为了验证这种相互作用,对生物素化的REP 2139 (REP 2139- b)进行了共免疫沉淀和下拉试验。用 NP40 裂解液裂解HepG2.2.15细胞,并用50 nM的REP 2139或REP 2139- b孵育过夜。

使用 NAP 生物素化的 REP 2139进行下拉试验,然后用质谱法鉴定出Hsp40伴侣蛋白DNAJB12,它是一种参与 SVP 形态发生的新蛋白。DNAJB12位于内质网膜,在那里它决定了新生跨膜蛋白的命运,并导致错误折叠蛋白的降解。DNAJB14是 Hsp40 家族成员,结构与 DNAJB12 相似,可能与 DNAJB12 形成异二聚体。

图2

将REP 2139与DNAJB12 (A) HepG2.2.15细胞相互作用,用蛋白G珠与抗生物素抗体和REP 2139 +/-生物素偶联培养。(B) HepG2.2.15细胞经M-270链霉亲和素珠和REP 2139 +/-生物素裂解培养。在这两个实验中,DNAJB12都在洗脱液(IP)和剩余的上清液(S)中被检测到。

图4,DNAJB12/B14敲低对HBsAg分泌的影响

(A) DNAJB12和DNAJB14 shRNA慢病毒的敲除剂量-反应效应。我们还证实,由于DNAJB14与DNAJB12高度相似,这两个shRNA之间没有交叉效应。

结果表明,REP2139 靶向 DNAJB12,并阻止 Hsc70/Hsp70的招募,以适当折叠HBsAg,导致其蛋白酶体的降解。这些结果与在体外存在 REP2139 时细胞内 HBsAg 无积累和 HBsAg 从肝脏清除一致。

DNAJB12是 Hsp40 的伴侣,对乙肝表面抗原的分泌至关重要,并被REP2139靶向。DNAJB12 与 Hsp70 和 HBsAg 共定位与其在 HBsAg 折叠中的伴侣功能一致。DNAJB14,可被 REP 2139 沉淀,但在 HBsAg 的分泌中不起主要作用。

假设 REP 2139 通过j结构域与 DNAJB12 相互作用,基于j结构域中暴露的α-螺旋的存在和REP 2139的双亲和性。需要做进一步实验以证实这种相互作用。在 REP 2139 存在或不存在情况下,Hsc70/Hsp70 与 DNAJB12 的相互作用将通过 PLA 和拉下试验(pull-down)进行评估。返回搜狐,查看更多

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发布于:福建省
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