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旷场实验:痛转化大鼠模型焦虑样情绪行为探索及其前扣带皮层兴奋性变化研究

原标题:旷场实验:痛转化大鼠模型焦虑样情绪行为探索及其前扣带皮层兴奋性变化研究

慢性疼痛和痛情绪之间的相互作用使得慢性疼痛的治疗在临床上具有挑战性,然而两者之间相互作用的时间点及其机制有待研究。

分组及造模

分组:大鼠随机分为假敏化组和敏化组,每组分为 Car 注射后 10 d 和 PGE2 注射后 4 h、24 h、8d、15 d(Car 10 d、PGE2 4h、PGE2 24 h、PGE2 8 d、PGE2 15 d)5 个时间点,其中 Car 10 d、PGE2 4h 和 PGE2 24 h 每组 6 只,PGE2 8 d 和 PGE2 15 d 每组 10 只。

造模:参考本课题组以往造模方法[21-22],敏化组大鼠于左后足足底皮下注射 1%角叉菜胶(Car)100 μL,待痛阈恢复至基础水平后,于左足足背中央注射浓度为 100 ng/25 μL 的 PGE2 25 μL;假敏化组第 1 次注射 25 μL 生理盐水,第 2 次注射同等 PGE2。

机械缩足阈(paw withdrawal thresholds,PWTs)

将大鼠置于铁丝网架透明箱内,适应环境 30 min,待大鼠笼子探索和主要梳理活动停止后,采用Chaplan 等建立的 up and down 法检测 PWTs,选取 0.4、0.6、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、15.0、26.0g 总计 9 种强度的纤维丝套组,强度从 4.0 g 开始,von Frey 丝垂直刺向大鼠足底中央,稳定持续用力6 s。如果大鼠有明显的缩足、甩足、抬足及舔足等躲避反应时,记为“X”,更换临近低一强度刺激丝继续检测;如果没有躲避反应,则记为“O”,更换临近高一强度刺激丝继续检测,以第 1 次出现“ XO ” 或 “ OX ” 为 开 始 , 再 连 续 测 4 次 , 得 到 一 串 以 “ O ” 或 “ X ” 组 合 的 序 列 , 如“OOXOXOX”。用公式:PWTs(g)=(10[Xf+κδ])/10000,计算并记录。Xf 为刺激丝强度的对数值,序列组合查表获得 κ 值,δ 此处为 0.231。若计算得出 PWTs > 26.0 g 或< 0.4 g,仍以 26.0 g 或 0.4g 作为最大或最小值。

旷场实验(open field,OF)

参考课题组前期的实验方法,测试前将实验大鼠放入实验室中适应环境 30 min,环境安静,室温(23 ± 2)℃,避免直射光线,保持较暗的环境。旷场实验箱长宽均 100 cm,高 50 cm,将大鼠置于旷场中央区域,先适应 30 s,再记录 5 min 的活动情况,结束后取出大鼠,用 10%乙醇清洗避免气味干扰。VisuTrack动物行为分析软件(上海欣软)进行数据分析:将旷场等分为 16 个边长为 25 cm 的正方形区域,设置最中心4 个正方形区域为中央区,其他区域为周围区。分析大鼠的总运动距离、中央区运动距离、中央区停留时间和中央区进入次数。

高架 O 迷宫(elevated zero maze,EZM)

环境要求及适应条件同 OF 实验。高架 O 迷宫为直径 100 cm,高 50 cm 的圆形平台,圆形平台由两个开放臂和闭合臂组成。将实验大鼠头部面向开放臂,轻缓地放置于闭合臂和开放臂的交界处,进行摄像,先适应 30 s,再记录 5 min 的活动情况,结束后取出大鼠,用 10%乙醇清洗避免气味干扰。VisuTrack动物行为分析软件(上海欣软)进行数据分析:将高架 O 迷宫分为开放臂和闭合臂交替的 4 个区域,有挡板的为闭合臂,无挡板的为开放臂。分析大鼠的总运动距离、开放臂运动距离、开放臂停留时间和开放臂进入次数。

本实验通过建立急慢性痛转化模型,观察不同时间点疼痛和情绪行为,发现 Car 和 PGE2 诱发的痛转化模型大鼠痛觉敏化状态可超过 14 d;此模型可出现短暂的应激性焦虑样行为改变,但在 1 ~ 2周内未观察到焦虑样行为改变,由此我们认为此模型不易诱发焦虑样情绪或者其情绪改变需要更长时间的观察;通过检测不同时间点 ACC 内 c-Fos 和 PV 阳性细胞的数量,发现痛转化模型大鼠 ACC 兴奋性发生改变,Car 诱导的炎性痛恢复后 ACC 兴奋性处于抑制状态,而注射 PGE2 后诱发痛觉敏化后ACC 兴奋性增强。本研究探讨了急慢性痛转化模型诱发痛焦虑样情绪的情况,为痛情绪的进一步研究提供一定的参考价值。返回搜狐,查看更多

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发布于:上海市
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